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Nerve Re-innervations by an End-to-side Neurorrhaphy of Myocutaneous Transplantation in Rats

末端對側邊神經吻合術最早被記載於19世紀，但那時並沒有廣泛被使用。此研究的目標為評估利用末端對側邊神經吻合術於大鼠自體移植及異體移植肌皮膚的神經再生效果。移植方法為於捐贈者取－含有薄肌(gracilis muscle)及閉孔神經(obturator nerve)的移植瓣藉由末端對側邊神經吻合術移植到接受者的閉孔神經上。評估神經再生性的方法為刺激肌肉的收縮能力、組織型態學觀察及計算切面的神經軸突數量。結果顯示神經於執行末端對側邊神經吻合術後皆有再生情形。接受者神經末梢軸突計算方面，具有橫切面的組別與沒有橫切面的組別以及自體移植跟異體移植的組別皆沒有統計學上的差異。於自體移植跟異體移植的組別都可見肌肉功能上的恢復。此外，免疫抑制的情形並沒有影響執行末端對側邊神經吻合術後的異體移植組別。這些結果顯示出神經再生性及功能恢復性可藉由末端對側邊神經吻合術於自體移植及異體移植上恢復。

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The Relationship of Alkaline Phosphatase and the Reproductive Activity in Dairy Goats

Limited information is available on the activity of alkaline phosphatase (ALP) at different stages of estrus cycle and pregnancy in goats. ALP of genital tract origin forms part of total activity in serum ALP. This study firstly analyzed the biochemical values in dairy does at different stages of pregnancy. Then, for the clinically healthy goats, controlled internal drug release (CIDR) devices containing progesterone were inserted to investigate the change of the activity of serum ALP. The activity of ALP collected from the vaginal tract on a wing of the CIDR device was evaluated. The results showed the ALP activity varies over a wide range, especially during pregnancy and postpartum. When samples of serum had been heated at 65℃ for 30 min, the percentage of ALP activity in parous does with CIDR insertion (31.66±15.73%) was significant higher than that in maiden does (14.15±2.91%) (＜0.005). ALP activity of samples collected from the genital tract in those parous does (272.94±83.37 mU/wing) were higher than that in maiden does (44.0±26.01 mU/wing) (＜0.001). The study concluded the ALP activity in serum and in genital tract is higher in parous does compared with that in virgin does stimulated by CIDR devices.

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以非生物素山葵過氧化酵素免疫組織化學染色法、聚合酶鏈鎖反應及原位雜合技術診斷禽類淋巴球增生性腫瘤疾病

禽類淋巴球增生性腫瘤性疾病，尤其是淋巴瘤，常發生於多種禽類品種，造成雞隻之死亡及產蛋率下降，在全球養雞產業上造成極大的經濟衝擊。大部分的禽類淋巴瘤多與馬立克病病毒(Marek's disease virus; MDV)、家禽白血病病毒(avian leukosis virus; ALV)及網狀內皮細胞增生症病毒(reticuloendotheliosis virus; REV)有關。這三種病毒不僅影響禽類產業且同時也威脅多種瀕臨絕種野生的鳥類，因為這三種疾病並無典型的病理特徵可供區別，故本研究主要目的為使用聚合酶鏈鎖反應(polymerase chain reaction; PCR)及非生物素山葵過氧化酵素免疫組織化學染色(non-biotin immunohistochemistry; non-biotin IHC)方法以建立區別診斷。本研究共收集了70個禽類淋巴瘤的組織樣本，其中包括60例石蠟包埋組織塊及10例新鮮病材；病材包括神經系統、心血管系統、消化道系統、泌尿生殖系統及淋巴系統。PCR結果顯示分別在ALV，MDV及REV檢測出45.7%，21.4%和22.9%的陽性率。IHC使用病毒抗體分別在ALV，MDV及REV檢測出71.4%，68.6%和54.3%的陽性率。結果顯示IHC在禽類淋巴瘤之石蠟包埋組織是一項較為有效的檢測工具，但是在已癌化成淋巴瘤的細胞卻檢測不到病毒的抗原蛋白。但使用原位雜合技術(in hybridization; ISH)技術卻成功協助IHC陰性的腫瘤細胞中偵測到REV的病毒核酸。由結果顯示，在回溯性調查研究中，結合使用IHC及ISH技術，大量提高禽類淋巴球增生性腫瘤性疾病病因的診斷率。

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添加外源性一氧化氮、細胞激素與脂多醣體對吳郭魚頭腎來源巨噬細胞發生apoptosis之影響

本研究之目的在於探討一氧化氮(nitric oxide; NO)、細胞激素與脂多醣體(lipopolysacharide; LPS)對吳郭魚頭腎巨噬細胞免疫功能之影響，並嘗試以流式細胞儀(flow cytometer)來分析NO對頭腎巨噬細胞的影響。實驗結果發現頭腎巨噬細胞如分別以干擾素－γ(interferon-γ; IFN-γ)和LPS、腫瘤necrosis因子－α(tumor necrosis factor-α; TNF-α)及LPS與IFN-γ作用24小時後，均能誘發頭腎巨噬細胞發生apoptosis，同時發現IFN-γ亦可誘發頭腎巨噬細胞發生necrosis。然而，當添加低濃度的NO donors時，結果發現會抑制經IFN-γ與LPS作用過之頭腎巨噬細胞發生apoptosis，同時亦發現介白素－4(interleukin-4; IL-4)和介白素－10(interleukin-10; IL-10)均會抑制頭腎巨噬細胞發生apoptosis。另外，實驗結果顯示頭腎巨噬細胞經高濃度之NO donors誘導24小時後，頭腎巨噬細胞會發生apoptosis，並且其發生之比例會隨著NO donors的濃度的提高而增加。

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漢黃芩素對正常大鼠睡眠造成的雙相作用之探討

漢黃芩素(wogonin)為中國傳統草藥黃芩(Scrutellaria baicelensis Georgi; Huang Qin)之有效成分，由其根部萃取而出。研究中指出，Wogonin是自由基清除者，並且具有消炎的作用。在睡眠機制的體液調節中，促進炎症反應的細胞動素對非快速動眼睡眠期(non-rapid eye movement sleep; NREMS)的調控影響重大，特別是IL-1β及TNF-α。本實驗之目的在探討wogonin對大鼠正常睡眠的影響。研究結果發現wogonin對正常睡眠具有兩個階段的作用：1.初期(initiation phase)作用：於亮期(light-period)開始前20分鐘打入wogonin後，造成在第1-2個小時之間NREMS百分比減少。2.晚期(late phase)作用：在暗期(dark-period)開始前20分鐘打入wogonin，在第8-12個小時的NREMS之百分比有增加的作用。另一組實驗中，發現wogonin能有效抑制IL-1β在暗期所增加的NREMS，這個結果表示初期作用是經由其抗發炎的作用。另外，我們於暗期先打入wogonin，待其作用至第七個小時，再給予GABA(下標 A)拮抗劑(bicuculline)，結果發現，wogonin之晚期作用中的NREMS增加現象，會被GABA(下標 A)拮抗劑所抑制。以上結果顯示，wogonin對大鼠正常睡眠具有雙相的作用，且分別證實了初期的作用可能是藉由阻抗IL-1β受體所造成的；而晚期作用可能是藉由某些未知的機制，造成腦中GABA神經傳遞物質分泌量增加或增進了GABA(下標 A)受體的活性，而增加NREMS。

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反芻動物疱疹病毒Ⅰ型及流行熱病毒混合疫苗之效力評估

Bovine herpesvirus type I (BHV-1) causes acute febrile respiratory disease in cattle, which is also known as infectious bovine rhinotracheitis (IBR). Bovine ephemeral fever virus (BEFV) also causes acute febrile respiratory disease mainly associated with pulmonary emphysema and edema. Infections caused by these two viruses in domesticated herds lead to great economic losses to the dairy farmers. In this study, BHV-1 and BEFV viruses were amplified in cultured MDBK (Maden Darby bovine kidney cells) and BHK (baby hamster kidney cell) cells, inactivated by BEI (binary ethylenimine), and formulated with water-in-oil-in-water adjuvant. No adverse reactions were observed in guinea pigs and cattle immunized with this vaccine. The titer of serum antigen-specific antibody in immunized cattle was significantly (p＜0.01) higher than that of the control group 8 weeks post primary vaccination and remained high for 12 months. In the challenge study conducted in guinea pigs, animals in the immunized group had a higher lymphocyte proliferation index than those in the control group and were protected from the challenge. Our results indicated that this vaccine formulation is effective to elicit both humoral and cell-mediated immune responses against BHV-1 and BEFV.

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水生病原菌對雜交吳郭魚(Oreochromis Niloticus×Oreochromis Mossambicus)頭腎來源之巨噬細胞非特異性免疫反應之影響

實驗目的在於研究吳郭魚頭腎來源巨噬細胞對水生病原菌的非特異性免疫反應。由實驗結果顯示經誘發之頭腎巨噬細胞的吞噬能力，以吞噬yeast之能力最高，吞噬Streptococcus iniae、Vibrio sp.及Edwardsiella tarda之能力最低。頭腎巨噬細胞吞噬Vibrio sp.後可產生最高的自由基量。此外，在細菌接種12小時內，頭腎巨噬細胞一氧化氮之產生和細胞死亡即有顯著地增加，其中以吞噬Vibrio sp.最高。利用FITC-Annexin V和propidium iodium進行染色後再以flow cytometer進行檢測，顯示在接種細菌12小時後，頭腎巨噬細胞發生apoptosis的比例顯著增加，其中以接種活的Vibrio sp.最高。綜合結果發現不同水生病原菌確實會影響頭腎巨噬細胞的非特異性免疫反應能力，並以apoptosis為主要誘發巨噬細胞死亡之機制。

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評估蛋雞餵飼幾丁聚醣之免疫調節

近年來由於抗菌劑的濫用引起許多的抗藥性問題，嚴重地影響到動物及人類的疾病控制，因此尋找其他的替代品成為目前相當重要的課題。本實驗主要研究幾丁聚醣配方以口服方式投與雞隻，了解其對於雞隻免疫反應之調控。以100ppm的濃度餵飼25週齡的蛋雞，分別測量餵飼前組(D0)、連續餵飼3天組(D3)、連續餵飼6天組(D6)以及D6組停止餵飼14天後觀察組(D20)血液中的IFN-γ及IL-2濃度變化；另外雞隻停飼14-20天後（S組）取其脾臟及腸道淋巴組織，觀察免疫激素的基因表現量變化。實驗結果發現D3組血中的IFN-γ濃度達到最高峰(3200.2pg/mL)，並於D20組血中濃度降至180.2pg/mL；而IL-2的血中濃度則仍呈現持續上升的現象。此外，S組於脾臟中的免疫激素基因包括IL-1β、IL-6、IL-10、IFN-γ和K203，以及盲腸淋巴組織中的IL-6及IFN-γ之基因表現量相較未餵飼雞隻皆呈現下降之趨勢。綜觀各項結果，幾丁聚醣以口服餵飼雞隻，能夠引起周邊血液趨向T(下標 H)1路徑，有效地提高雞隻的免疫反應。然而淋巴組織則似乎有趨向減緩T(下標 H)1反應的傾向，惟需進一步的實驗證明。

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14日齡雞胚胎累代感染造成之H5N2低病原性家禽流行性感冒病毒毒力變異

為瞭解H5N2低病原性禽流感病毒毒力演化趨勢，以臺灣2003年12月分離之H5N2低病原性禽流感分離株1209/03進行試驗，設計以14日齡雞胚胎繼代感染後探討病原性變化情形。結果在無胰蛋白酶的培養液中，病毒對雞胚胎纖維芽細胞感染由第10代開始形成病毒斑，且ICPI由第5代之0.71提高為1.64，對細胞及腦部感染毒力明顯升高。有胰蛋白酶的培養之下，感染CEF細胞皆可形成病毒斑，但有大小之差異，第20代開始病毒斑由1.4mm變大為2.0mm。IVPI值在第40代時，由原來毒株的0提高為1.45；試驗結果顯示1209/03病毒經過14日齡雞胚胎繼代之後，毒力有逐代增強的趨勢。但值得注意的是，HA蛋白切割位胺基酸序列雖然在第20代及第30代由－REKR-之3個鹼性氨基酸轉變為－RRKKR-5個鹼性氨基酸，但在第40代及第50代又轉變回到原來的3個鹼性氨基酸序列，表示影響H5N2禽流感病毒的病原性不完全是HA切位鹼性胺基酸的多寡所決定。

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2010年台灣部分雞隻家禽白血病J亞群之血清抗體盛行率

家禽白血病病毒(avian leukosis virus; ALV)為雞場中常見引起腫瘤性疾病與造成雞隻生產問題的病原。由於台灣的土雞並未進行任何ALV-J的清除撲滅計畫，因此本研究希望藉由血清學的調查，了解台灣的肉用種雞(broiler breeder; BB)與蛋用種雞(layer breeder; LB)於ALV-J的感染情形。實驗選用6個包含不同年齡、品系的蛋用肉用種雞之雞場，調查ALV-J抗體盛行率，採集血液樣本以商品化酵素標示免疫吸附分析套組之檢驗(ELISA kit)進行抗體檢測。蛋用種雞樣本中，結果顯示只有1雞群抗體檢測為陰性，其餘皆為陽性，雞群的抗體陽性盛行率從6%到86.7%不等；肉用種雞樣本檢驗皆為抗體陽性，抗體陽性盛行率從15%到97.8%不等。同時發現雞隻週齡越高，相對抗體的陽性盛行率也越高。另外收集蛋用種雞血液樣本感作具有ALV-J感受性的DF-1細胞，PCR檢測病毒核酸皆為陰性結果。結果顯示：目前台灣的肉用種雞與蛋用種雞仍然存在ALV-J感染的情形。